用于临床前药物潜在致癌性评价小鼠二代模型----KI.C57-ras v2.0

发布时间:2020-09-24

KI.C57-ras(致癌性评价模型V2.0)是在原Tg.C57-ras(致癌性评价模型Tg.C57-ras V1.0)基础上,进一步改进建立的致癌性评价模型。本模型采用干细胞打靶方式构建,将人c-Ha-ras基因(3个拷贝),首尾串联,准确插入小鼠15号染色体E3位点获得的可稳定遗传的小鼠模型。与V1.0相比,具有转基因表达水平更高,遗传更加稳定,个体间差异更小的优势;目前已经获得的部分致癌性验证结果显示,该模型对致癌物易感,与国际上通用的模型具有相似的表型。

1、二代模型构建策 

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KI. C57-ras 打靶载体

1.全序列合成基因;2. 定点插入15E3位点;3. 3个拷贝;4. 首尾串联;5. C57BL/6干细胞

2、二代模型KI.C57-rasV2.0蛋白水平及与日本rasH2模型的蛋白水平比较 

 

   


3、二代模型KI.C57-rasV2.0的生长曲线 

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生长曲线分性别测定,每组25只;1-8月龄,覆盖模型使用时段;结果与野生小鼠无异


4.模型的致癌性药物验证实验

4.1临床观察

溶媒对照组未见异常改变。MNU组(75 mg/kg)动物于D2可见体重减轻;KI.C57-ras 动物D56可见外部体表肉瘤,多发组织是阴皮区域; D63统计, 雄性动物16/25,性动物8/25出现肉瘤。在部分小鼠,爪子,舌上均发现肿瘤。而wt等动物同期未见临床异常改变

       

4.2体重变化 

 

   

4.3 MNU给药后生存率曲线 

 

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4.4致癌性实验——病理解剖肿瘤发生 

 



结语:综上,本模型从遗传学角度看,与日本模型极其相似,即插入位点相似,基因序列一致,基因排列顺序一致,基因拷贝数一致,且小鼠模型背景一致;从现代遗传学知识认识,可以预测本模型与日本raSH2具有相同,或者非常接近的表型。从我们开展过大半的致癌性验证实验来看,实验结果非常符合预期,与国际上公认的rasH2小鼠模型有相似的表型,故我们认为可以用于致癌性实验。